Несмотря на многолетнюю историю существования вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), эффективность проведения программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) остается на уровне 30-40 %. Большое значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия, то есть его способность обеспечить необходимые этапы имплантации.

В мировой практике продолжаются поиски путей влияния на ткань эндометрия с целью улучшения морфологического и функционального состояния, что могло бы увеличить эффективность программ вспомогательных репродуктивных технологий. В качестве терапии продуктами клеточных технологий возможно использование внеклеточных везикул. Их применение является многообещающим подходом к стимуляции иммуномодуляции и регенерации тканей.

Цель исследования – оценка влияния внеклеточных везикул на клеточную культуру эндометрия.

Материалы и методы. Забор материала осуществлялся методом пайпель-биопсии эндометрия. Полученные фрагменты ткани для транспортировки помещали в фосфатно-солевой раствор с добавлением пенициллина-стрептомицина, гентамицина и амфотерицина. Для выделения первичных клеток использовали сочетание механического и химического методов. Внеклеточные везикулы выделялись из фолликулярной жидкости путем последовательного ультрацентрифугирования. Везикулы вносили в культуральную среду в концентрации 5 % и 10 %. Исследовали динамику роста, морфологические и морфометрические параметры эндометриальных клеток при культивировании в присутствии внеклеточных везикул.

Биологический материал для выделения первичной культуры клеток эндометрия и внеклеточные везикулы фолликулярной жидкости был предоставлен Уральским научно-исследовательским институтом охраны материнства и младенчества. Работа выполнена в Центре биотехнологии и биоинженерии Института естественных наук и математики Уральского федерального университета г. Екатеринбурга.

Результаты. В ходе работы была отработана методика получения клеточных культур эндометрия. Первичная клеточная культура эндометрия гетерогенна и содержит фибробластоподобные клетки стромы и железистые клетки с эпителиальноподобной морфологией. После добавления везикул динамика роста культуры эндометрия не нарушается, клетки сохраняют свою естественную морфологию: встречаются звездчатые клетки стромы, имеющие отростки, и мелкие округлые эпителиоподобные клетки. При добавлении везикул не выявлено критических изменений в структуре цитоплазмы клеток, она остается гомогенной. При этом дозозависимо увеличивается ядерно-цитоплазматическое отношение в клетках эндометрия, что свидетельствует об изменении функционального состояния клеток в культуре. Под воздействием везикул увеличивается количество многоядерных эндометриальных клеток. В опытных группах встречались клетки, имеющие до 7 ядер.

При окрашивании флуоресцентными красителями отдельно на препарате, который микроскопировали через 2 часа после нанесения 200 мкл везикул, обнаружили клетки, окруженные ареолом из маленьких сферических образований, которые являются внеклеточными везикулами.

Заключение. В ходе работы были получены данные о влиянии внеклеточных везикул на рост клеток в культуре, на размеры и количество их ядер. Было отмечено, что внеклеточные везикулы не оказывают токсического действия на культуру клеток. Под влиянием везикул увеличивается количество клеточных ядер. При введении везикул в культуру клеток увеличивается пролиферативная активность клеток, происходят морфофункциональные изменения клеточной структуры ткани эндометрия.

Khramtsova AYu, Bashmakova NV. Global view on the problem of «thin» endometrium: solutions to the problem in assisted reproductive technology (literature review). Russian Journal of Human Reproduction. 2019; 25(4): 69-76. Russian (Храмцова А.Ю., Башмакова Н.В. Современный взгляд на проблему «тонкого» эндометрия: пути решения в программах вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) //Проблемы репродукции. 2019. Т. 25, № 4. С. 69-76.) doi: 10.17116/repro20192504169

Leshchenko OYa. Chronic endometritis and reproductive disorders: versions and contraversions (review). Bulletin of Siberian Medicine. 2020; 19(3): 166-176. Russian (Лещенко О.Я. Хронический эндометрит и репродуктивные нарушения: версии и контраверсии //Бюллетень сибирской медицины. 2020. Т. 19, № 3. С. 166-176.) doi: 10.20538/1682-0363-2020-3-166-176

Boiarskiĭ KIu, Gaidukov SN, Pal'chenko NA. Modern look on endometrial receptivity and thin endometrium in art cycles (a review). Russian Journal of Human Reproduction. 2013; (4): 51-60. Russian (Боярский К.Ю., Гайдуков С.Н., Пальченко Н.А. Современный взгляд на проблему рецептивности и тонкого эндометрия в программах ВРТ (обзор литературы) //Проблемы репродукции. 2013. № 4. С. 51-60)

Gomzikova MO, Gaifullina RF, Mustafin IG, Chernov VM, Miftahova ZR, Galyavich AS, Rizvanov AA. Membrane microvesicles: biological properties and involvement in pathogenesis of diseases. Kletochnaya transplantologiya i tkanevaya inzheneriya. 2013; 8(1): 6-11. Russian (Гомзикова М.О., Гайфуллина Р.Ф., Мустафин И.Г., Чернов В.М., Мифтахова З.Р., Галявич А.С., Ризванов А.А. Мембранные микровезикулы: биологические свойства и участие в патогенезе заболеваний //Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2013. Т. 8, № 1. С. 6-11.) doi: 10.23868/gc121588

Wolf P. The nature and significance of platelet products in human plasma. Br J Haematol. 1967; 13(3): 269-288. doi: 10.1111/j.1365-2141.1967.tb08741.x

Puddu P, Puddu GM, Cravero E, Muscari S, Muscari A. The involvement of circulating microparticles in inflammation, coagulation and cardiovascular diseases. Can J Cardiol. 2010; 26(4): 140-145. doi: 10.1016/s0828-282x(10)70371-8

Muralidharan-Chari V, Clancy JW, Sedgwick A, D’Souza-Schorey C. Microvesicles: mediators of extracellular communication during cancer progression. J Cell Science. 2010; 123(10): 1603-1611. doi: 10.1242/jcs.064386

Panteleev MA, Abaeva AA, Nechipurenko DYu, Obydenniy SI, Sveshnikova AN, Shibeko AM. Physiology and pathology of extracellular vesicules. Oncohematology. 2017; 12(1): 62-70. Russian (Пантелеев М.А., Абаева А.А., Нечипуренко Д.Ю., и др. Физиология и патология внеклеточных везикул //Онкогематология. 2017. 12(1): 62-69.) doi: 10.17650/1818-8346-2017-12-1-62-70

Andreeva EA. Immunoactive factors of follicular fluid in women in the in vitro fertilization program: Abstr. dis. … cand. biol. sci. Novosibirsk, 2021. 24 p. Russian (Андреева Е.А. Иммуноактивные факторы фолликулярной жидкости у женщин в программе экстракорпорального оплодотворения: Автореф. дис. … канд. биол. наук. Новосибирск, 2021. 26 с.)

Tamkovich SN, Tutanov OS, Laktionov PP. Exosomes: generation, structure, transport, biological activity, and diagnostic application. Biologičeskie membrany. 2016; 33(3): 163-175. Russian (Тамкович С.Н., Тутанов О.С., Лактионов П.П. Экзосомы: механизмы возникновения, состав, транспорт, биологическая активность, использование в диагностике //Биологические мембраны. 2016. Т. 33, № 3. – С. 163-175.) doi: 10.7868/S0233475516020122

Kraevaya EE, Silachev DN, Beznoshchenko OS, Goryunov KV, Shevtsova JuA, Khutornenko AA, et al. Effect of extracellular vesicles of follicular fluid on ovarian coagulation hemostasis. Russian Journal of Human Reproduction. 2020; 26(2): 18-26. Russian (Краевая Е.Е., Силачев Д.Н., Безнощенко О.С., Горюнов К.В., Шевцова Ю.А., Хуторненко А.А., и др. Влияние внеклеточных везикул фолликулярной жидкости на коагуляционный гемостаз яичника //Проблемы репродукции. 2020. Т. 26, № 2. С. 18-26.) doi: 10.17116/repro20202602118

Andreeva EA, Khonina NA, Pasman NM. Microvesicles in follicular fluid with women in IVF program. Russian Journal of Immunology. 2019; 13(2): 139-140. Russian (Андреева Е.А. Хонина Н.А., Пасман Н.М. Микровезикулы фолликулярной жидкости у женщин в цикле ЭКО //Российский иммунологический журнал. 2019. Т. 13, № 2. С. 139-140.) doi: 10.31857/S102872210006428-5

Nasiri S. Infusible platelet membrane as a platelet substitute for transfusion: an overview. Blood Transfus. 2013; 11(3): 337-342. doi: 10.2450/2013.0209-12

By`kov VL. Chastnaya gistologiya cheloveka (kratkij obzorny`j kurs). SPb.: SOTIS, 1997. 298 s. Russian (Быков В.Л. Частная гистология человека (краткий обзорный курс). СПб.: СОТИС, 1997. 298 с.)